3 آسان اقدامات میں TBE بفر بنانے کا طریقہ

TBE بفر Tris بیس، بورک ایسڈ اور EDTA (مکمل طور پر Tris-Borat-EDTA) سے بنا ایک بفر حل ہے. یہ بفر اکثر ڈی آر اے کی مصنوعات کے تجزیہ میں اگروس جیل الیکٹروفوریسس کے لئے استعمال کیا جاتا ہے جس کے نتیجے میں پی سی آر پرسمیشن، ڈی این اے صاف پروٹوکول یا ڈی این اے کلونونگ تجربات ہوتے ہیں.

ٹی بی ای بفر خاص طور پر چھوٹے ڈی این اے ٹکڑے ٹکڑے (میگاواٹ <1000) کے علیحدہ ہونے کے لئے مفید ہے، جیسے پٹیاں اینجیم کھدائی کے چھوٹے مصنوعات. ٹی بی ای کو زیادہ بفیرنگ کی صلاحیت ہے اور TAE بفر سے زیادہ تیز رفتار قرارداد پیش کرے گی. TAE بفر Tris بیس، acetic ایسڈ اور EDTA (Tris-acetate-EDTA) سے بنا ایک حل ہے.

TBE عام طور پر TAE سے زیادہ مہنگا ہے اور ڈی این اے کے لیگاس کو روکتا ہے، جو اس وجہ سے ہو سکتا ہے کہ بعد میں ڈی این اے کی صافی اور لائیویشن کے اقدامات کا مقصد ہو. جو پیروی کرنے والے تین آسان قدموں کے ساتھ، TBE بفر بنانے کے بارے میں سیکھیں. یہ بفر بنانے کے لئے تقریبا 30 منٹ سے زیادہ نہیں لگنا چاہئے. یہاں کیسے ہے:

EDTA کے اسٹاک حل

ایک EDTA (ethylenediamine tetraacetic ایسڈ) کا حل وقت کے آگے تیار کیا جانا چاہئے. EDTA تقریبا 8.0 تک ایڈجسٹ نہیں کیا جائے گا جب تک EDTA مکمل طور پر حل میں نہیں جائیں گے. 0.5 ایم اے ای ڈی اے کے 500 ملٹیٹر اسٹاک کے حل کے لئے، EDTA اختیومیم نمک (93 9.2) کے 93.05 گرام وزن. اس کے بعد 400 مللویروں سے منحصر پانی میں اس کو تحلیل کریں اور پی ایچ ایچ کو NaOH کے ساتھ ایڈجسٹ کریں. اس کے بعد، 500 مللرز کی حتمی حجم کے حل کے اوپر.

اسٹاک حل TBE

54 جی ٹیس بیس (ایف ڈبلیو = 121.14) اور 27.5 جی بورک ایسڈ (ایف ڈبلیو = 61.83) وزن اور ڈیونیسڈ پانی کے تقریبا 900 مللویروں میں دونوں کو پھیلانے کی طرف سے ٹی بی ای کے متمرکز (5x) سٹاک حل بنائیں. اس کے بعد 0.5 ایم ای اے اے اے (پی ایچ 8.0) کے 20 مللٹر شامل کریں اور 1 لیٹر کے آخری حجم کو حل کو ایڈجسٹ کریں. یہ حل کمرے کا درجہ حرارت پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے لیکن پرانے حل بڑے پیمانے پر حل میں تشکیل دے گا. بفر کو شیشے کی بوتلوں میں ذخیرہ کرو اور اگر کسی کی بناوٹ کی گئی ہے تو ختم کردیں.

ٹی بی ای کے ورکنگ حل

اگروس جیل الیکٹروفورسیسس کے لئے، ایک ٹی بی ای بفر 0.5x (توجہ مرکوز کی اسٹاک کے 1:10) کے حراستی میں استعمال کیا جا سکتا ہے. منحصر پانی میں 10x کی طرف سے اسٹاک کے حل کو ڈھونڈیں. فائنل سلیٹ توجہ مرکوز 45 ملی میٹر ٹیس بوریٹ اور 1 ایم ایم ایڈی اے ہے. بفر ایک Agarose جیل چلانے میں استعمال کے لئے اب تیار ہے.

تمہیں کیا چاہیے

TBE بفر بنانے کے لئے، آپ کو صرف چار مادہ کی ضرورت ہوگی. اس فہرست پر باقی اشیاء سامان ہیں. ضرورت ہے چار مادوں EDTA اختیڈیم نمک، Tris بیس، بورک ایسڈ اور deionized پانی ہیں.

سامان کے طور پر، مناسب طور پر پی ایچ میٹر اور انشانکن کے معیار کی ضرورت ہوگی. اس کے علاوہ، آپ 600 ملین ملٹیٹر اور 1500 ململٹر بکاکر یا فاسکس کی ضرورت ہوگی. آپ کے آلات کی ضروریات کو سلنڈروں کو گریجویشن اور سلاخوں کو ہلانا اور پلیٹیں ہلانا ہے.

اس لیبارٹری میں انوینٹری کی جانچ پڑتال کریں جو آپ کو اس بات کا یقین کرنے کے لئے استعمال کر رہے ہیں کہ آپ شروع کرنے سے قبل آپ کی ضرورت ہے. کسی حل کو تیار کرنے کے وسط میں روکنے کے بجائے کچھ بھی برا نہیں ہے کیونکہ آپ مناسب مواد سے باہر چلتے ہیں. اگر آپ کی لیب اسکول یا آپ کے کام کی جگہ پر ہے، مناسب اہلکاروں کو چیک کریں تاکہ یہ دیکھ لیں کہ ان کی اسٹاک میں تمام اشیاء ہیں. ایسا کرنے کے آخر میں آپ کو وقت اور توانائی بچا سکتا ہے.